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功能性膜蛋白定制表达服务
突破结构瓶颈。高产量、天然构象制备重组 GPCR、离子通道、转运蛋白和 ECD。
挑战：复杂靶点的表达瓶颈
跨膜蛋白是一类重要的治疗靶点，参与细胞信号、转运和识别。它们的功能异常与多种严重疾病相关，占已批准药物靶点的一半以上，以及近 90% 的抗体类药物靶点。
分离和鉴定这些靶点存在明显的技术困难。高度疏水的跨膜区很难在体外保持天然构象，常常导致聚集、错误折叠和重组蛋白产量偏低。博欧特生物 通过优化的表达平台解决这些瓶颈，以便稳定复杂蛋白，用于结构生物学和检测开发。
优化的表达与纯化方案
Utilizing high-density HEK293 无血清哺乳动物表达系统, we minimize host cell contamination while ensuring accurate post-translational modifications. Depending on target topology (single-pass vs. multi-pass), we deploy 7 specialized technological platforms.
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概述：技术比较与应用
类别 | 平台 | 机制 / 形式 | 适合的下游应用 |
|---|---|---|---|
单次跨膜 | 胞外结构域（ECD） | 分泌型功能结构域。（现有 1,000 多种重组靶点库存）。 | 结合动力学、体外功能实验、SPR。 |
多次跨膜（纯化） | 合成纳米盘 | 专用聚合物包裹疏水区域，并重组天然磷脂。 | 冷冻电镜、结构生物学、高分辨率 SPR。 |
MSP 纳米盘 | 膜支架蛋白（MSP）将人工磷脂包裹在靶点周围。 | 生化实验、NMR。 | |
肽纳米盘 | 设计肽在水溶液中屏蔽疏水结构域。 | ELISA、功能筛选。 | |
去垢剂 | 两亲分子形成胶束以增溶。 | 初步提取靶点、结晶。 | |
多次跨膜（未纯化） | 膜纳米颗粒（MNP） | 使用完整细胞膜，生物相容性高，稳定性好。 | FACS、ELISA、细胞实验。 |
病毒样颗粒（VLP） | 自组装纳米颗粒（100–150 nm），将靶点嵌在天然双层膜中。 | 抗体发现用免疫原、CAR-T。 | |
外泌体（EXO） | 细胞通过质膜融合释放的 30–150 nm 天然膜囊泡。 | 治疗递送追踪、天然功能实验。 |
已验证的膜蛋白表达案例
查看各标准平台上复杂跨膜重组靶点的功能验证数据。博欧特生物 优化制备流程，以稳定靶点构象，便于检测开发和先导分子筛选。
Human BCMA Protein, mFc Tag (orb689396)
Human GPRC5D full length protein-synthetic nanodisc (orb1291763)
ELISA 检测： Elisa plates were added with Flag Tag GPRC5D-Nanodisc (0.5 μg/per well) on an anti-Flag monoclonal antibody pre-coated (0.5 μg/per well) plate. Serial diluted anti-GPRC5D monoclonal antibody solutions were added, washed, and incubated with secondary antibody before Elisa reading. From above data, the EC50 for anti-GPRC5D monoclonal antibody binding with GPRC5D-Nanodisc is 32.86 ng/ml.
人 GPRC5D 纳米盘，Flag 标签，SDS-PAGE
Human AQP5 full length protein-PeptiNanodisc (orb3145502)
ELISA 结合： Elisa plates were pre-coated with C-Flag Tag AQP5-PeptiNanodisc (0.2μg/per well). Serial diluted anti-Flag monoclonal antibody solutions were added, washed, and incubated with secondary antibody before Elisa reading. From above data, the EC50 for anti-Flag monoclonal antibody binding with AQP5-PeptiNanodisc is 0.756ng/ml.
纯度分析： The purity of Human AQP5-PeptiNanodisc is greater than 90% as determined by SEC-HPLC.
Human Claudin-6 full length protein via MNP Platform (orb1291770)
ELISA 结合： Elisa plates were pre-coated with 0.5 μg/per well purified human CLDN6 full length membrane nanoparticles. Serial diluted anti-CLDN6 monoclonal antibody (orb1291233) solutions were added, washed, and incubated with secondary antibody before Elisa reading. From above data, the EC50 for anti-CLDN6 monoclonal antibody binding with CLDN6 full length membrane nanoparticles is 34.36 ng/ml.
FACS 分析：
A. Negative Control 1: CLDN6 full length membrane nanoparticles samples were stained only with Goat anti-human lgG 488 secondary antibody.
B. Negative Control 2: Control membrane nanoparticles samples were stained with anti-CLDN6 antibody (orb1291233) at 2 μg/mL, followed by Goat anti-human IgG 488 secondary antibody.
C. Negative Control 3: CLDN6 full length membrane nanoparticles samples were stained with anti-GPRC5D antibody (an irrelevant antibody) at 2 μg/mL, followed by Goat anti-human IgG 488 secondary antibody.
D. CLDN6 full length membrane nanoparticles samples were stained with anti-CLDN6 antibody (orb1291233) 浓度为 2 μg/mL，随后使用山羊抗人 IgG 488 二抗。
Human CLDN18.2-Nanodisc Expressed via VLP Platform (orb1291767)
ELISA 检测：Flag 标签的人 CLDN18.2 VLP（orb1291767) can bind to Anti-CLDN18.2 monoclonal antibody (Zolbetuximab; IMAB362) and the EC50 is 15.37ng/ml.
CLDN18.2 VLP 的 FACS 分析：
A. CLDN18.2 VLP stained with Goat anti-human IgG Fc-PE secondary antibody.
B. Control VLP stained anti-CLDN18.2 antibody (Zolbetuximab; IMAB362) followed by Goat anti-human IgG Fc-PE secondary antibody.
C. CLDN18.2 VLP stained with anti-BCMA antibody (irrelevant antibody) followed by Goat anti-human IgG Fc-PE secondary antibody.
D. CLDN18.2 VLP stained with anti-CLDN18.2 antibody (Zolbetuximab; IMAB362) followed by Goat anti-human IgG Fc-PE secondary antibody.
Human CD24 full length protein via Exosome(EXO) Platform
ELISA 检测： ELISA plates were pre-coated with 0.5 μg/per well purified human CD24 exosome. Serial diluted Anti-CD24 monoclonal antibody solutions were added, washed, and incubated with secondary antibody before ELISA reading. From above data, the EC50 is 69.61 ng/ml.
CD24 外泌体的纳米颗粒跟踪分析
详细比较：纯化膜平台
合成纳米盘 | MSP 纳米盘 | 肽纳米盘 | 去垢剂 | |
|---|---|---|---|---|
膜稳定剂 | 聚合物 | MSP | 肽 | 去垢剂 |
纳米盘直径 | ~10nm | 7-17nm | 理论上不限 | 理论上不限 |
磷脂来源 | 天然磷脂 | 合成磷脂 | 少量天然磷脂 | 无 |
制备方法 | 在细胞膜提取物中加入聚合物材料 | 无细胞表达 / 去垢剂纯化后组装 | 去垢后直接加入肽 | 加入去垢剂替换磷脂后再纯化 |
是否含去垢剂？ | No | 可能有痕量 | 可能有痕量 | 是 |
能否定量靶蛋白？ | 是 | No | No | 是 |
应用 | 免疫检测/ ELISA / SPR / 冷冻电镜 | 免疫检测 / ELISA / SPR / 冷冻电镜 | ELISA / SPR / 细胞实验/ 冷冻电镜 | ELISA / SPR / 冷冻电镜 |
详细比较：未纯化膜平台
名称 | 优点 | 缺点 | 应用 |
|---|---|---|---|
纳米膜颗粒（MNP） |
| Difficult to quantify target protein precisely, mostly total protein quantification. | ELISA / 噬菌体展示 / 免疫检测 / CAR-T 阳性率检测 |
病毒样颗粒（VLP） |
|
| ELISA / 噬菌体展示 /免疫检测/ CAR-T 阳性率检测 |
外泌体（EXO） |
|
| ELISA / 噬菌体展示 / 免疫检测 / CAR-T 阳性率检测 |
定制蛋白合成服务流程
从基因设计到交付，流程保证定制蛋白质量稳定、可重复。
1. 项目设计
序列分析、密码子优化和载体构建。
➔
2. 表达
HEK293 无血清哺乳动物细胞培养与转染。
➔
3. 制备
组装为纳米盘、VLP、MNP，或纯化 ECD。
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4. 质量控制
严格的结构和功能验证流程。
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5. 交付
安全运输，并提供完整质控文件。
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